유전학 진핵 생물의 DNA 분리

유전학 진핵 생물의 DNA 분리 [유전학] 진핵 생물의 DNA 분리.pptx 목차 1.실험목표 2.실험배경 3.원핵 세포 VS 진핵 세포 4.식물의 Genomic DNA의 분리 단계 5.Genomic DNA의 분리 6.CTAB(cetyltrimethylammonium bromide) 7.실험방법 8.실험결과 본문 실험방법 sample tissue 을 microtube에 넣고, 100 µL 2X CTAB 용액 첨가한후, plastic pestle을 이용하여 갈아준다. 위 microtube에 600 µL 2X CTAB 용액 더 넣고 섞은 후, (Add β mercaptoethaolfinal cons. 1%) 75℃에서 30분간 반응시킨다. (final volume 700 µL) 온도를 실온까지 낮춘 뒤, 같은 부피의 chloroform을 넣고 원심분리기 (5000rpm, 5min)를 이용하여 층을 분리시킨다. 상층액 450~500ul 따서 새 microtube에 옮긴 후한번 더 같은 부피의 chloroform을 넣고 원심분리하여 상층액 250~300ul를 새 microtube에 옮겨 다당류와 단백질을 제거한다. 같은 부피의 Isopropanol를 넣고 pulse voltexing하여 원심분리기(12000rpm, 10min)를 이용하여 DNA를 침전시킨다. cold 70% 에탄올을 넣고 원심분리 하여(5000rpm, 5min) DNA pellet을 씻어준 후, 에탄올을 최대한 제거하여 실온에서 말린다. (DNA pellet이 다 마르면 투명해진다.) H2O (100ul)를 첨가하여 DNA pellet을 녹인다. 본문내용 진핵 생물로부터 추출하도록 한다. 실험배경 1) DNA(Deoxyribonucleic acid) : 유전 정보를 담고 있다. 2) DNA 구조 : 2중나선 구조 3) DNA 구성요소 (1) 당(sugar): Deoxyribose (2) 인산(phosphate) (3) 염기(base) - Purine계 : A(adenine), G(guanine) - Pyrimidine계 : T(thymine) ,C(cytosine) - 각각의 퓨린은 하나의 피리미딘과수소 결합을 통해 결합. A = T, G Ξ C 뼈대형성 원핵 세포 vs 진핵 세포 진핵 생물 gDNA는 상대적으로 DNA의 크기가 크므로(150kb~) DNA분리 시 shearing force를 최소화해야 한다. 식물의 Genomic DNA의 분리